Metoda identifikacije tankog sloja
Uzmite 0,5g epimedijumskog praha za lekovito bilje ili odgovarajuću količinu ekstrakta, dodajte 10 ml etanola, potopite 30 minuta, filtrirajte i uparite filtrat. Dodajte 1ml etanola da rastvorite ostatak, koji je testni rastvor. Referentna supstanca za icariin je izmerena, rastvorena u metanolu i razblažena do 0,1 mg / ml, što je bio referentni rastvor. Otpipetirajte 10 μl svake od otopina za ispitivanje i referentne otopine, na H tankom sloju silikagela H iste natrijeve karboksimetil celuloze kao vezivo, s etil acetat-butanon-mravlje kiseline-voda (10: 1: 1) : 1) kao sredstvo za razvijanje, odmotano, izvađeno, osušeno na vazduhu i stavljeno u UV lampu (365 nm) za ispitivanje. Na hromatogramu ispitnog uzorka pojavljuje se ista tamnocrvena mrlja na poziciji koja odgovara kromatogramu referentne supstance; raspršena sa trihlorinacijom Aluminijski testirani rastvor je ponovo nanet UV lampom (365 nm) kako bi se otkrila ista narančasto-crvena fluorescentna mrlja.
2. Spektrofotometrijsko određivanje ukupnih flavonoida u Epimediumu i njegovih ekstrakata
Referentni proizvod icariin je precizno izmeren i formulisan u standardni rastvor od 10 ug / ml sa metanolom. Precizno odmerite količinu ovog praška proizvoda (ekvivalentno oko 1 mg icariina), sonicirajte metanolom 25ml 30 minuta, razblažite u volumetrijsku tikvicu od 50ml, filtrirajte mikroporoznom membranom 0.45μm, tj. Testna otopina i referentna otopina uzeti su odvojeno, a apsorbancija je mjerena na valnoj duljini od 270 nm s reagensom kao slijepa proba, a izračun je dobiven.
3. Određivanje icariina u Epimediumu i njegovog ekstrakta pomoću HPLC
Kromatografski uslovi i ispitivanje prikladnosti sistema: ODS2 5u C18 (4mm × 150mm) kolona; mobilna faza: acetonitril-voda (30:70); talasna dužina detekcije: 270nm; protok: 0.8ml / min. Broj teoretskih ploča nije manji od 1500 na osnovu icariina.
Priprema referentnog rastvora: referentni proizvod icariin je precizno izmeren, i pripremljen je rastvor od 0,1 mg / ml sa metanolom.
Priprema ispitnog rastvora: precizno izmerite odgovarajuću količinu ovog praška proizvoda (ekvivalentno oko 1 mg icariina), sonikirajte sa metanolom 25 ml 30 minuta, razblažite do 50 ml volumetrijske bočice, upotrebite 0,45 μm mikroporozni filter.
Metoda analize: 10 µl svakog uzorka i referentni rastvor je ubrizgan u HPLC instrument, a površina je izračunata metodom spoljnog standarda.